产品简介:

本试剂盒采用速率法酶联免疫吸附法(ELISA),专用于定量检测大鼠血清、血浆、肝组织匀浆中的 αL 岩藻糖苷酶(AFU)活性。检测范围覆盖 0.313-20 U/L,灵敏度达 0.16 U/L,适用于肝癌筛查、肝功能检测、溶酶体功能及遗传性代谢病研究等领域。
产品名称:大鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)elisa试剂盒
英文名称:AFU ELISA Kit
产品规格:48T/96T
产品货号:CS-6139E
检测原理:

大鼠 αL 岩藻糖苷酶 (AFU) ELISA 试剂盒的原理是速率法,通过 AFU 催化岩藻糖苷底物的水解反应,生成的产物与显色剂作用,利用吸光度变化速率定量检测酶活性。
固相化:微孔板预先包被 AFU 特异性显色底物。
结合:加入标准品或样本,AFU 催化底物水解生成显色产物。
检测:直接检测产物的吸光度变化,无需额外二抗孵育。
显色:产物随酶促反应持续生成,颜色深浅与 AFU 活性相关。
测定:用酶标仪在 450nm 波长连续测定吸光度变化速率,活性与速率值成正比。
实验步骤:

试剂准备:将试剂盒平衡至室温(20-25℃),洗涤缓冲液按1:19稀释。标准品梯度稀释至所需浓度。
加样:每孔加入100μL标准品或样本,37℃孵育90分钟。
洗涤:弃去液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后甩干,重复5次。
加检测抗体:每孔加入100μL检测抗体-HRP,37℃孵育60分钟。
洗涤:同步骤3。
显色:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分钟。
终止:每孔加入50μL终止液,立即摇匀(颜色由蓝变黄)。
检测:450nm波长测定吸光度(OD值),15分钟内完成。
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操作步骤:

1.试剂提前室温平衡 30 min,浓缩洗涤液按说明书稀释配制。
2.设置空白孔、标准品孔、待测样品孔,精准加样后封板。
3.37℃恒温孵育结合反应,结束后弃孔内液体拍干。
4.加满洗涤液浸泡清洗,重复洗板 3–5 次,去除未结合杂质。
5.除空白孔外,每孔加入 HRP 酶结合物,再次 37℃温育。
6.重复洗板流程洗净游离酶标抗体,保证背景干净。
7.依次加入显色液避光显色,待梯度蓝色清晰显现。
8.加入终止液终止反应,颜色由蓝转黄,即刻用酶标仪读取 OD 值。
9.根据标准曲线拟合计算,得出样本目标物质浓度。