激肽释放酶2Elisa试剂盒质控质检操作流程
点击次数：756 更新时间：2022-07-21
激肽释放酶裂解激肽原产生激肽，主要有缓激肽、胰激肽及蛋氨酰胰激肽，赖氨酰缓激肽可被尿液及血液中的氨基肽酶降解为缓激肽。因都具有缓激肽的结构，故作用相似，其中缓激肽作用最强，胰激肽的活性只有缓激肽的1/2，而蛋氨酰胰激肽的活性则只有其1/3。激肽与激肽受体结合后参与机体许多组织器官的功能调节和病理生理过程。
激肽释放酶2Elisa试剂盒质控质检操作流程：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF工作液50μl。
（5）酶标板置37℃箱的湿盒内，孵育60min。
（6）洗板，阴性对照孔每孔加入PBS50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF工作液50μl。
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔工作液100μl。
（8）酶标板置37℃箱的湿盒内，孵育60min。
（9）洗板，阴性对照孔每孔加入PBS50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF工作液50μl。
（10）每孔加TMB显色液100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
（11）每孔加100μl2mol/LH2SO4终止反应。
（12）分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以由容器上的划痕或指印等造成的光。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定。
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