本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人骨特异性碱性磷酸酶水平。用纯化的人骨特异性碱性磷酸酶抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入骨特异性碱性磷酸酶，再与HRP标记的骨特异性碱性磷酸酶抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的骨特异性碱性磷酸酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人骨特异性碱性磷酸酶浓度。

　　ALP-B Elisa Kit使用要求如下：

　　试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数。　　封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。

　　严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。