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胱抑素CElisa试剂盒使用时注意事项都有哪些?

点击次数:684 更新时间:2022-08-23

  胱抑素C是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质,是一种半胱氨*蛋白酶抑制剂。编码基因属于管家基因,能在所有的有核细胞内以恒定速度持续转录与表达,无组织特异性。其分子量小(13KD),生理条件下带正电荷,能自由从肾小球滤过,*被肾小管上皮细胞重吸收并于细胞内降解,不重新回到血液中;同时肾小管上皮细胞也不分泌胱抑素C至管腔内。

  胱抑素CElisa试剂盒检测原理:
  采用双抗体夹心ELISA法。用抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物*化的抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、生物*与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物,胱抑素CElisa试剂盒在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,抗原浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中指标的浓度。
  胱抑素CElisa试剂盒使用注意事项:
  标本宜在新鲜时检测,如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。
  冻结标本溶解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混合,不要在混匀器上强烈震荡。
  浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤,澄清后再检测。
  反复冻融会使蛋白效价降低,所以代测样本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。
  ELISA实验标准曲线平直,一般有以下原因:标准曲线制备是否不当,洗孔不净,吸孔不充分,读数不准确或是吸量误差。查找原因,即可找到相应解决方案。
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