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水稻内标准gos9基因LAMP试剂盒反应五要素

点击次数:454 更新时间:2022-12-20

水稻内标准gos9基因LAMP试剂盒反应五要素:


参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:


①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。


②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。


③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。


⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。


⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。


⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。


引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

葡萄糖铵培养基100g用于鉴别细菌利用铵盐作为氮源并分解葡萄糖的试验。

尿素琼脂培养基基础250g用于鉴别肠道菌尿素酶试验

缓冲动力-硝酸盐培养基250g供产气荚膜梭菌动力和硝酸盐还原测定用

动力—硝酸盐培养基(A法)250g供鉴别测定细菌液化明胶用

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克氏双糖铁琼脂250g用于鉴别肠道菌发酵葡萄糖和乳糖,及产生硫化氢的生化反应。(ISO)

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GVC增菌液250g用于椰毒假单胞菌酵米面亚种的增菌培养基

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亚碲酸钾(四号琼脂冻干配套试剂)5mg/支x10每支添加于500ml(025030)中配成四号琼脂培养基。

弧菌显色培养基选择性添加剂冻干试剂10支每支添加于100ml(CRM008)弧菌显色培养基中。

Skirrow琼脂配套试剂10支/盒每支添加于100mL的 Skirrow琼脂基础中

改良CCD琼脂配套试剂10支/盒每支添加于100ml(022212)中配成MLST

Bolton肉汤配套试剂10支/盒每支添加于100mL的 Bolton 肉汤基础中

10支/盒每支添加于100ml(022212)中配成MLST

亚碲酸钾(亚碲酸盐肉汤冻干配套试剂)2mg/支x10每支添加于100ml(022011)中配成亚碲酸盐肉汤。



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