泰泽隐孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒实验规则：

1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但有专业人员进行矫正。

2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。

3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。

4、实验时，要使底物避光保存。

5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

9、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。

10、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

‍为确保实验数据的可靠性和重复性，实验人员需严格遵守以下补充操作规范：

11. 反应板密封时需使用光学级封板膜，避免PCR反应过程中蒸发导致体系浓度变化。封膜前应检查孔边缘有无液体残留，防止交叉污染。

12. 扩增程序设置时需进行温度校准，建议使用第三方温度验证仪对PCR仪各孔位进行梯度检测，温差应控制在±0.3℃范围内。

13. 荧光信号采集阶段应关闭实验室光源，避免环境光干扰。建议在反应板上方加装遮光罩，特别是使用多通道检测时。

14. 每次实验必须设置NTC（无模板对照）和阳性对照。NTC出现扩增曲线时，需排查气溶胶污染可能性，建议使用含UDG酶的防污染体系。

15. 数据分析时采用仪器配套软件进行基线自动校正，手动调整范围应控制在3-15个循环之间。对于非典型扩增曲线（如锯齿状、平台期不稳），需用原始数据复核阈值设定。

16. 实验结束后所有接触过核酸的耗材需浸泡于10%次氯酸钠溶液30分钟，高压灭菌处理后丢弃。工作台面需用RNAase去污剂擦拭，紫外线照射30分钟。

17. 标准品稀释应选择低吸附离心管，采用"涡旋-瞬时离心"的混匀方式。梯度稀释时每次更换移液器吸头，避免产生气溶胶。

18. 建立实验记录追溯体系，包括试剂批号、仪器运行参数、环境温湿度、操作人员等信息。建议对关键步骤进行双人复核签字。

19. 定期进行室间质评，每季度至少参与一次实验室间比对。当Ct值偏差＞1.5时，需启动仪器维护程序。

20. 建立异常结果处理流程：异常应重复检测，二次异常需更换试剂批次复检，三次异常启动偏差调查程序并形成书面报告。