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发光细菌法的测定方法

点击次数:1258 更新时间:2016-01-25

1.生物测试法——发光细菌法

    利用污染物对革兰氏阴性兼性厌氧微生物所发射出的蓝绿光强度的影响,来判断水质受污染的情况。ELISA试剂盒

    发光细菌是一种非致病性的普通细菌,具有发光能力,正常条件下,经培养后能发出肉眼可见绿色光.波长490nm。凡是干扰或损害细菌呼吸或生理过程的任何因素都能使细菌的发光强度立即发生改变。并随毒物浓度增加.发光强度减弱。

    这一特性可用于污水和地面水中污染物毒性的测定.具有较高的灵敏度和重现性,特别是测定综合毒性。如重金属、CN、酚类化合物、抗生素等对其发光过程具有毒害作用。

发光细菌法的测定方法如下:

(1)新鲜发光细菌培养物测定法

    发光细菌液体在发光培养基中培养(至对数生),稀释至适当浓度后,加入测试管中,再加入试液,作用10~20min后,读出并记录对照管和样品管发光强度变化数据。

(2)发光细菌与海藻混合测定法

    利用有毒物质对发光细菌没有直接毒害作用,而对藻类有毒害作用的特点,把培养好的发光细菌悬浮液和培养好的藻类悬浮液混合后加入测试管,光照一段时间后再测定发光强度的变化。因为毒物的作用使藻类放氧能力下降,发光细菌发光能力也下降。ELISA试剂盒

(3)冷冻干燥发光细菌制剂测定法

    将已培养至对数生的发光细菌制成干燥粉剂,在冰箱中冷藏,使用时取出.加入重冲液保温平衡10~15min,恢复到干燥前的生理状态进行试验。

2.细菌学监测法

    在实际工作中,经常以检验细菌总数,特别是检验作为粪便污染的指示细菌,如总大量菌群、粪大肠菌群、粪链球菌、肠道病毒等,来间接判断水的卫生学质量。

(1)水样采集

   采集细菌学检验用水样,必须严格按照无菌操作要求进行;防止在运输过程中被染,并应迅速进行检验。一般从采样到检验不宜超过2h;在10℃以下冷藏保存不得超过6h。

采集江、河、湖、库等水样,可将采样瓶沉人水面下10~15cm处,瓶口朝水流上游方同.使水样灌人瓶内。需要采集一定深度的水样时,用采水器采集。采集自来水样,首先用酒精灯灼烧水灭菌或用70%的酒精消毒,然后放水3min.再采集约为采样瓶容积翦80%的水量。

(2)细菌学监测法

水污染的细菌学监测指标有以下两个:

①细菌总数 细菌总数指lmI,水样在营养琼脂培养基中,于37℃、24h培养后所生兰的细菌菌落总数。它可反映水体微生物污染的程度,如每1mL自来水中细菌总数不碍超过10个(具体检测方法见项目三)。

②大肠菌群数 大肠杆菌是一群需氧和兼性厌氧的、能发酵乳糖、产酸、产气的革兰氏阴性无芽孢杆状细菌。主要来源于人畜粪便中,在肠道中普遍存在并且是数量zui多的一种。故大肠杆菌群被当作监测水体是否受粪便污染的指标。总大肠菌群是指那些能在3j℃、48h之内使乳糖发酵产酸、产气.需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽孢杆菌,以每升水样中所含有的大肠菌群的数目表示。大肠菌群数指每升水样中含有的大肠菌群的数量。如每升饮用水中大肠菌群数不得超过3个。大肠菌群数量的测定:多管发酵法和滤膜法(具体检测方法见项目四);ELISA试剂盒

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