细胞复苏：

  1. 将新鲜培养基置于37℃水浴锅中回温，回温后喷以75%酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。如配置：50mL*培养基(含10%FBS，1%青双抗) 44.5mL基础培养基+ 5mL FBS + 0.5mL青双抗。

  2. 戴防护手套后，自液氮罐中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，立即放入37℃水槽中快速解冻（避冰晶重新结晶而造成细胞死亡），轻摇冷冻管使其在2分钟内全部融化，以75%酒精擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。

  3. 将解冻的1mL细胞悬液缓缓加入细胞培养瓶内，再向瓶中加入10mL*培养基(稀释比例为1:10)，混合均匀，放入37℃，5%CO2的恒温培养箱中培养。取0.1ml解冻胞悬液作存活测试。(Sf9细胞在27℃生长，可不需CO2) 

  4. 一般而言，细胞大都不需立即去除冷冻保护剂(例如DMSO)。若要立即去除，则将解冻的细胞悬液加入含有5-10ml培养基之离心管内，离1300rpm，5分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入CO

  2培养箱培养。若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后隔日更换培养基。

传代培养：

1.37℃恒温培养约48小时，待细胞长满80-90%后，从培养箱取出75cm

  2培养瓶，倒掉培养基。加入5mLPBS缓冲液吹打以洗去残留血清，倒掉缓冲液。

   2.沿壁（无细胞的一面）缓缓加入1mL溶液消化细胞约

1min，轻轻摇晃，倒掉残余，将培养瓶置于恒温箱中约1min，拿出培养瓶轻轻拍打一下细胞贴壁的一面。

  注意：消化温度是37℃，加液后用移液管反复吹打分散细胞。

  3.向瓶中加入5mL*培养基，反复吹打均匀2min，从中取出至0.5ml小离心管中，向管中加入80μl台盼蓝溶液，混匀，从混合液中取出10μl至盖好盖玻片的计数板上，计算细胞密度及活率。

   4.将5mL细胞悬液全部吸出，分别接种1mL悬液到原培养基瓶和另一新的培养瓶中，其余舍弃。再向两瓶中各加入10mL*培养基，置于CO2培养箱养。（细胞传代时按1：5或更大比例稀释）