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单细胞凝胶荧光检测细胞凋亡

点击次数:1214 更新时间:2016-08-08

以来人们一直认为不同种类的抗生素通过结合不同的作用靶点和各异的作用机制发挥杀菌作用。如 β-内酰胺类抗生素在单细胞凝胶电泳分析(SCGE)是在单细胞水平进行DNA损伤和修复检测的荧光检测方法,具有简单、快速、灵敏和原位等特点。因其细胞电泳形状颇似彗星,又称彗星试验(comet Etssay)。

低熔点琼脂糖凝胶将细胞包埋于载玻片上,细胞裂解液破坏细胞膜、核膜及其他生物膜,细胞内RNA、蛋白质及其他成分进入凝胶,继而扩散至裂解液中,而核DNA仍原位附着于核骨架。如果细胞未受损伤,因核DNA分子量大,电泳中停留于原位,经荧光染色后呈现圆形的荧光团,无拖尾现象。

若细胞受损,在碱性电泳液(pH>13)中,DNA双链解螺旋且碱变性为单链,单链断裂的小分子量DNA碎片进入凝胶,向阳极迁移,形成拖尾。细胞核DNA损伤愈严重,产生的断链或碱变性片段愈多,其片段愈小;电场作用下迁移的DNA量多,迁移的距离长,荧光显微镜下可观察到尾长增加和尾部荧光强度增强。一定条件下,DNA迁移距离(彗星尾长)和DNA古量(荧光强度)分布与DNA损伤程度呈线性相关。

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