17羟孕酮Elisa试剂盒HRP的氧化耦联色原底物对主要有4—氨基：耦联底物对（Trinder试剂）和2—甲基—2—苯并噻唑啉腙（MBTH）；二甲基苯胺（DMA）耦联底物对（Ngo—Lenhoff试剂）等。
在H202存在下，4—氨基和经HRP作用缩合形成红色的醌亚胺，其在入＝492 nm处有zui大吸收。
该耦联色原底物对用于固相ELISA时，敏感性一般较低，反应见光不稳定，而且易发生多聚化，缺乏适当的反应终止剂。因此，该试剂常限于葡萄糖、三酰甘油、肌酸激酶等临床生化指标的酶法检测应用。1989年日本学者用其作为色原底物建立了一种以HRP作标记酶的均相酶免疫试验，可用甲醛终止反应。但这种方法仅停留在实验室阶段，其后也未见有其他实验室的应用报道，可能还有其固有的缺陷。
4—氨基：耦联底物对色原底物的具体配方为①显色底物溶液：将4—氨基以2 mmol／L，以25 mmol／L和H202以0．8 mmol／L的浓度溶于0．1 mol／L磷酸盐缓冲液（pH7．2），即可应用；②终止液：未见报道；③测定波长：492nm。
MBTH和DMA在HRP的作用下缩合生成紫蓝色的吲达胺（indamine），zui大吸收波长为590nm，见光不稳定。用盐酸或硫酸终止反应后，pH应为3．0左右，pH值的降低使显色从紫蓝色转变为清晰的蓝色，zui大吸收波长从590nm变为595nm，然而pH值的进一步降低，将导致光吸收消失。
MBTH：DMA耦联对在固相ELISA测定几乎没有应用。
碱性磷酸酶（AP）
在17羟孕酮Elisa试剂盒测定中，碱性磷酸酶的色原底物zui常用的是对硝基苯磷酸盐。在碱性磷酸酶的作用下生成对硝基酚（），其在入＝405 nm处有zui大吸收.
由于碱性条件下的光吸收增强，并可使碱性磷酸酶失活，因而可使用碳酸钠作为终止剂。二乙醇胺缓冲液中不能有单乙醇胺，因为单乙醇胺对碱性磷酸酶有温度依赖的抑制作用。较高浓度的无机磷可竞争性地抑制碱性磷酸酶的活性，贮存时间过长由于非酶水解而产生硝基酚和磷酸盐时即可出现这种情况，此时呈黄色。
因此，用于ELISA测定时，必须五色。的摩尔消光系数（光吸收）的变化取决于溶液的pH及温度、离子强度、蛋白含量，当温度从15~C升高至45℃时，在入＝405 nm处的光吸收将增加5％～7％。
在17羟孕酮Elisa试剂盒测定时，色原底物的具体配方为①显色底物溶液：将以10 mmol／L的浓度溶于含1 mmol／LMgCl：的0．1 mol／L二乙醇胺缓冲液（pH 9．8），即可应用；②终止液：0．5 mol／L碳酸钠；③测定波长：405nm。