猪胸膜肺炎放线杆菌PCR试剂盒产生各种条带的常见原因

1.产生非特异性条带

1)用RT阴性对照检测是否被基因组DNA污染。如果RT阴性对照的PCR结果也显示同样条带，则需要用DNase I重新处理样品。

2)在PCR反应中，非特异的起始扩增将导致产生非特异性结果。在低于引物Tm 2至5℃的温度下进行退火，降低镁离子或是目的DNA的量将减少非特异性结果的产生。

3)由于mRNA剪切方式的不同，根据选择引物的不同将导致产生不同的RT-PCR结果。

2. 产生弥散（smear）条带

1)在PCR反应体系中di一链产物的含量过高

2)减少引物的用量

3)优化PCR反应条件/减少PCR的循环次数

4)在用DNase处理被DNA污染的RNA样品时，其产生的寡核苷酸片段会产生非特异性扩增，一般会显示为弥散背景。

3. 产生大分子量的弥散条带

1)大多数情况下是由于退火温度过低而导致的非特异性的起始及延伸产生的

2)对于长片段的PCR，建议将反应体系中cDNA的浓度稀释至1:10（或1:100-1:200）