CRF elisa酶联免疫试剂盒(间接法)步骤：

(1) 抗原包被：用包被液将PEDV抗原作1∶5稀释包被反应板，每孔100μl，同时设阴性细胞培养物对照孔，置4℃过夜。
(2) 洗涤：用洗涤液洗涤2次，每次2min，沥干。
(3) 加入被检血清：用保温液将被检血清作1∶100稀释，加入反应板相邻的两个孔中，每孔100μl。同时作阴、阳性标准血清对照，置37℃孵育1h。
(4) 洗涤3次：方法同上。
(5) 加入酶结合物：用保温液将酶结合物作1∶4 000稀释，加入反应孔中，每孔100μl，置37℃孵育1h。
(6) 洗涤3次：方法同上。
(7) 加入底物：每孔100μl，置室温暗盒内显色20min。
(8) 加入终止液：每孔50μl，静置5min。
(9) 测定OD值：用检测仪，于492nm波长，按仪器使用及制定标准要求调节仪器，测定各反应孔的OD值，记录结果。

试剂使用须知：
（1）请参照相关法规、文献、MSDS等信息，理解并掌握好试剂的特性，再进行安全操作。
（2）通常购买试剂时一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话，更加注意其他保管和管理。
（3）万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。对于使用后的废弃物，不要或者旧的试剂，应按照相关法律法规正当处理。
（4）购买后，请务必确认标签上的注意事项；做好预防颠倒，摔坏的措施和管理体制；在使用前再次确认标签上的注意事项，做好必要的安全对策；对没有标明其危害特性、有害特性的，也要慎重地进行操作；必须带好防护用具，小心翼翼进行操作。

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