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大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-1复苏操作流程

点击次数:903 更新时间:2021-07-13

大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-1复苏操作流程:

1. 准备工作,开水浴锅,预热试剂,超净工作台紫外照射 30min,找到对应细胞在液氮罐中的位置
2. 紫外照射后风机吹 10min 后,酒精擦拭台面,放入试剂和离心管,取 15ml 离心管,加入 9ml 培养液
3. 在液氮罐中取出细胞,先拧松放液氮,再拧紧,将冻存管放入 PE 手套中,然后水浴融化后取出,1-2min
4. 将冻存管喷酒精后放入超净台内,擦干管壁,用 1ml 头将细胞转移到已加培养液的离心管中
5. 800-1000rpm 离心 5min,注意配平
6. 将离心好的细胞弃上清,加入 5ml *培养基重悬,用移液管吹打 8-10 次, 避免产生气泡,将细胞悬液接种到 10cm 培养皿中,补加 5ml 培养液
7. 混匀,十字法或者 8 字法
8. 将混好的细胞放入培养箱中培养 冷冻保存方法一:冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽储存。
冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。

GV3101(pSoup)感受态细胞(化学转化法或热激法)
GV3101(pSoup-p19)感受态细胞(化学转化法或热激法)
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EHA105感受态细胞(化学转化法或热激法)
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AGL1感受态细胞(化学转化法或热激法)
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LBA4404感受态细胞(化学转化法或热激法)
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GV3101 电转感受态细胞

 

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