耗牛免疫球蛋白GELISA检测试剂盒洗涤方法：

1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μl，注入与吸出间隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μl，浸泡1-2分钟，吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。洗板5次。

实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，每个孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分钟内配制)，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。

3.弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μl /每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(临用前15分钟内配制)100μl，加上覆膜，37℃温育1小时。

5.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

6.每孔加底物溶液100μl，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右(根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止)。

7.每孔加终止液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。

8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

9.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。

LX-2, 人肝星形细胞株

3T3-L1, 小鼠前脂肪细胞

C2C12, 小鼠肌原细胞

 细胞名称

MCF-7（MCF7）（ATCC来源）, 人乳腺癌细胞

MDA-MB-231（ATCC来源）, 人乳腺癌细胞

Raji，人Burkitt's淋巴瘤细胞

Saos-2，人成骨肉瘤细胞

Caco-2，人结直肠腺癌细胞

NCI-N87 [N87]人胃癌细胞

MGC80-3（MGC-803）人胃癌细胞

EC109，人食管癌细胞

HGC-27人胃癌细胞

AGS人胃腺癌细胞

U251人胶质瘤细胞

THP-1人单核白血病细胞

HuH-7人肝癌细胞

SK-MEL-1, 人皮肤黑色素瘤细胞

A549, 人肺癌细胞系

SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌耐药细胞株

A-375 [A375], 人恶性黑素瘤细胞株

A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株

SP2/0, 小鼠骨髓瘤细胞

WM35, 人黑色素瘤细胞

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌细胞株

U-2 OS, 人骨肉瘤细胞

WM451, 人黑色素瘤细胞

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌细胞

C6, 大鼠脑胶质瘤细胞

UM-UC-3, 人膀胱移行细胞癌

Hela, 人宫颈癌细胞系

HNE2, 人鼻咽癌细胞系

SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌细胞系

786-O [786-0], 人肾透明腺癌细胞

HEC-1A, 人子宫内膜癌细胞系

Caki-1, 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞