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轮状病毒Elisa试剂盒的比色测定抗体含量

点击次数:940次 更新时间:2017-10-09

 目前常用的几种轮状病毒Elisa试剂盒方法有:测定抗体的间接法,测定抗原的双抗体夹心法和测定抗原的竞争法等。本实验采用间接法测定单克隆抗体效价。其主要过程为:首先将已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反应板的凹孔内,加待测抗体,保温后洗涤以除去未结合的杂蛋白质,加酶标抗抗体,保温后洗涤,加底物保温30分钟后,加酸或碱终止酶促反应,用目测或光电。
三、操作步骤
①抗原包被:兔抗人IgG ELISA试剂盒作为抗原,用包被液l:8000稀释,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜。
②洗涤:次日倾去凹孔内的液体,洗涤液洗3次。
③封闭:加l00μL/孔封闭液,室温放置0.5h.
④洗涤:用洗涤液洗3次。
⑤加待测样品(一抗):将含单克降抗体的细胞培养上清在另-块板上用PBS 连续稀释(按照1:2或1:10),100μL /孔加到 已包被的板上,每个样品平行做两份,PBS 或空白培养基作为阴性对照,已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育 1~2h。
⑥洗涤:用洗涤液洗3次。
⑦加酶标抗抗体:兔抗鼠IgG-HRP,用封闭液l :8000稀释,100μL/孔,加盖37℃恒温箱温育1h。
⑧洗涤:用洗涤液洗5次,蒸馏水洗2次。
⑨显色:加新鲜配制的底物溶液100μL/孔,室温暗处放置5~30min,显示蓝色。
⑩终止反应、比色:加50μL/孔终止液。轮状病毒Elisa试剂盒颜色变黄;用酶标仪测定450nm 处各孔的吸光值,阳性反应的zui大稀释度为待测 样品的效价。
    利塞膦酸相关物质B标准品        20mg
    相关物质混合物标准品        50mg
    膦甲酸相关物质B标准品        10mg
    氯甲基碳酸异丙酯标准品        100mg
    洛匹那韦系统适配物标准品        10mg
    相关物质A标准品        15mg
    美仑孕酮醋酸酯相关物质A标准品        25mg
    美仑孕酮醋酸酯相关物质B标准品        25mg
    相关物质D标准品        30mg
    美司那相关物质A标准品        50mg
    美司那相关物质B标准品        50mg
    美托洛尔相关物质A标准品        20mg
    美托洛尔相关物质D标准品        50mg
    标准品(2-8℃)        ea
    锰福地吡相关物质A标准品        15mg
轮状病毒Elisa试剂盒

 

 

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