Elisa试剂盒实验中蛋白质的分离纯化
Elisa试剂盒实验由于各种蛋白质分子颗粒巨细、亲水程度不同,故盐析所需的盐浓度也不一样,因此调理混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉积。
影响盐析的要素有:
温度:除对温度灵敏的蛋白质在低温(4度)操作外,通常可在室温中进行。
蛋白质盐析常用的中性盐,主要有硫酸铵、、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。
通常温度低蛋白质溶介度下降。但有的蛋白质(如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白)在较高的温度(25度)比0度时溶解度低,更简单盐析。
pH值:大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶介度zui低。
ELISA试剂盒实验盐析前血清要加等量生理盐水稀释,使蛋白质含量在2.5-3.0%。
蛋白质浓度:蛋白质浓度高时,欲别离的蛋白质常常夹杂着别的蛋白质地一同沉积出来(共沉现象)。
其中使用zui多的硫酸铵,它的长处是温度系数小而溶解度大(25度时饱满溶液为4.1M,即767克/升;0度时饱满溶解度为3.9M,即676克/升),在这一溶解度范围内,很多蛋白质和酶都可以盐析出来;
硫酸铵分段盐析作用也比别的盐好,不易导致蛋白质变性。硫酸铵溶液的pH常在4.5-5.5之间,当用别的pH值进行盐析时,需用硫酸或氨水调理。
Elisa试剂盒蛋白质在用盐析沉积别离后,需要将蛋白质中的盐除掉,常用的方法是透析,即把蛋白质溶液装入秀析袋内(常用的是玻璃纸),用缓冲液进行透析,并不断的替换缓冲液,因透析所需时刻较长,所以在低温中进行。
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Elisa试剂盒
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