联系我们   Contact
搜索   Search
新闻动态   News首页>>新闻动态>>Elisa试剂盒的配制方法及选购提醒

Elisa试剂盒的配制方法及选购提醒

点击次数:743次 更新时间:2018-07-23

目前,Elisa试剂盒在实验室中已经相当的普及了,绝大多数的试剂盒都是用于检测未知样本中抗原的浓度。而市场中试剂盒并非随便使用的,需要根据操作者们的自身条件与要求。我们在选择Elisa试剂盒应该重点考虑实验类型
虽然Elisa试剂盒有多种类型,但是它们都有一个共同特点,就是进行抗原捕获。一般捕获形式包括将抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。In-cellELISA和酶联免疫斑点ELISPOT是两种特殊的类型,In-cellELISA需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化,然后再用抗体原位检测。ELISPOT有点像蛋白印迹Westernblot,先在带膜的微孔板中培养细胞,然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外,我们还需要根据自身需要选择96孔板或是384孔板进行ELISA实验。
通常人们使用双抗夹心法进行ELISA实验,双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和检测抗体之间,这种方法既灵敏又有效,受到了许多研究者的青睐。不过有时候双抗夹心法并不是好的选择,例如有时候抗原特别小让两个大抗体难以附着,又或者抗体只有一个抗体结合位点。在上述情况下,竞争性ELISA就更为适用,这种方法是采用带标记的纯化抗原与样本中无标记的抗原进行竞争,以结合捕获抗体。
单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA,实际上有时候二者结合效果更好。双抗夹心法ELISA中捕获抗体与检测抗体(不论多抗还是单抗)的配对很有讲究。我们不希望捕获抗体与检测抗体竞争抗原上的同一位点,为此我们就需要确保捕获抗体和检测抗体所识别的抗原表位不存在重叠。如果捕获抗体和检测抗体之间发生了冲突,就会对实验结果产生较大影响。要避免这一问题,我们可以选择购买“matchedpair”的捕获/检测抗体对,这些打包在一起的抗体是商家经过验证才的好组合。
根据试剂盒的性能选择,首先了解Elisa试剂盒范围
Elisa试剂盒实验中为了确定信号和背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时,应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
Elisa试剂盒的配制方法:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,注意每批的细节。在使用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。
第二、多咨询供应商的技术员,具体了解产品后再考虑购买
一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。为了优化灵敏度,建议孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物ELISA试剂盒酶的活性。
第三、Elisa试剂盒选购注意事项
1.选择时间久的试剂盒供应商,以免遇见骗子公司。
2.浓缩洗涤液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟
3.选择并购买后在效期内使用,不同批号的试剂不能混用。  上一篇 免疫球蛋白G4Elisa试剂盒之操作技术的影响 下一篇 E2定量elisa试剂盒检测GXM定量试验的临床意义

021-69985169
13611928337

环保在线

推荐收藏该企业网站