检测胱抑素CElisa试剂盒标本时要注意的事情
点击次数：643次 更新时间：2019-11-13
在检测胱抑素CElisa试剂盒标本时，需要仔细认真，在遇到问题时冷静对待。总结了以下几点需要注意：
1、本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。
保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。
2、冻结标本溶解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混合，不要在混匀器上强烈震荡。
3、浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
4、反复冻融会使蛋白效价降低，所以代测样本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。
ELISA实验标准曲线平直，一般有以下原因：标准曲线制备是否不当，洗孔不净，吸孔不充分，读数不准确或是吸量误差。查找原因，即可找到相应解决方案。
检测目的是为实验提供准确可靠定量分析实验依据。为保证实验数据的可靠性，在实验过程中必须坚持全面质量控制和全过程质量控制。
胱抑素CElisa试剂盒操作步骤
1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5． 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。
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