荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程。随着PCR反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，结合相应的软件对产物进行分析，可以得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模版的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃，运用该项技术，可以对DNA、RNA样品进行相对定量、定量和定性分析。

　　PCR试剂盒产品及特点：

　　1.即开即用，用户只需要提供肠贾第虫样品。

　　2.根据肠贾第虫保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。

　　3.灵敏度可以达到几百拷贝/反应。

　　4.一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。

　　5.PCR试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。

　　PCR试剂盒使用方法：

　　一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）

　　1.注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。

　　2.标记6个离心管

　　3.用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR模板稀释液（用带芯枪头，下同）。

　　4.在7号管中加入5μL1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

　　5.换枪头，在6号管中加入5μL1×10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

　　6.换枪头，在5号管中加入5μL1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

　　7.重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

　　二、样品DNA的制备

　　8.如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。

　　9.用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。

　　三、设置qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）

　　10.如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。

　　11.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加。