白介素1βELISA试剂盒广泛应用于临床和科研领域
白介素1β(IL-1β)是一种重要的炎症细胞因子,在多种炎症和免疫反应中发挥关键作用。IL-1β的水平变化可以反映炎症反应的强度,因此其检测对于疾病诊断、治疗监测和基础研究具有重要意义。白介素1βELISA试剂盒作为一种高灵敏度、高特异性的检测工具,广泛应用于临床和科研领域。
一、原理:
1.预包被与样本捕获:将特异性抗IL-1β单克隆抗体固定于酶标板孔中,样本中的IL-1β通过抗原-抗体反应被捕获。
2.酶标记系统:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗,与捕获的IL-1β形成“抗体-抗原-抗体”夹心结构。
3.显色反应:加入显色底物TMB,HRP催化TMB显色,颜色的深浅与IL-1β的浓度成正比。
4.结果测定:通过酶标仪在450nm波长处测量各孔的吸光度(OD值),根据标准曲线计算样本中IL-1β的浓度。
二、白介素1βELISA试剂盒的应用领域
1.感染性疾病:IL-1β水平与肺损伤程度呈正相关。例如,武汉协和医院的研究发现,IL-1β>50pg/ml的患者更易发展为急性呼吸窘迫综合征(ARDS),为临床干预提供早期预警指标。
2.自身免疫病:类风湿关节炎患者滑膜液中IL-1β浓度可达正常值的200倍。通过定期检测,医生可动态评估疾病活动度,指导生物制剂(如IL-1受体拮抗剂)的精准用药。
3.肿瘤免疫:在PD-1抑制剂治疗中,IL-1β水平变化可预测免疫相关不良反应(irAE)。北京大学肿瘤医院的数据显示,治疗第3周IL-1β升高>3倍的患者,发生结肠炎的风险增加4.7倍。
三、白介素1βELISA试剂盒的操作步骤
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2.温育:酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
3.洗涤:弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
4.加辣根过氧化物酶标记亲和素:每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液100μl,37℃温育60分钟。
5.显色:依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内)。
6.终止:依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
7.测定:用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值),在加终止液后15分钟以内进行检测。
四、白介素1βELISA试剂盒的性能特点
1.高灵敏度:试剂盒的灵敏度可达2.2pg/ml,能够检测到单核细胞激活后释放的微量细胞因子。
2.高特异性:通过抗体筛选技术,试剂盒能够精准区分IL-1家族成员,与人IL-1α、IL-1sRII等蛋白的交叉反应率低于0.1%。
3.动态范围广:检测上限可提升至1000pg/ml,覆盖从基础分泌到病理爆发的全浓度范围。
4.操作简便:试剂盒采用预包被抗体和即用型试剂,简化了操作步骤,减少了人为误差。
总之,白介素1βELISA试剂盒作为一种高灵敏度、高特异性的检测工具,在炎症和免疫研究中发挥着重要作用。其不断优化的性能和便捷的操作步骤,使其在临床诊断和科研应用中具有广阔的发展前景。
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