产品简介：

本试剂盒采用间接法酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠血清、血浆中的抗内皮细胞抗体（AECA）浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于自身免疫性血管炎、内皮细胞损伤及心血管自身免疫病研究等领域。

产品名称：大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)elisa试剂盒

英文名称：AECA ELISA Kit

产品规格：48T/96T

产品货号：CS-5722E

检测原理：

大鼠抗内皮细胞抗体 (AECA) ELISA 试剂盒的原理是‌间接法‌，通过固相载体包被抗原，捕获样本中特异性抗体，再用酶标记的二抗进行识别，最后通过底物显色反应来定量检测。

‌固相化‌：微孔板预先包被血管内皮细胞抗原。

‌结合‌：加入标准品或样本，AECA 抗体与固相抗原结合。

‌检测‌：加入 HRP 标记的抗大鼠 IgG 二抗，与结合在固相载体上的抗体形成复合物。

‌显色‌：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由蓝色变为黄色。

‌测定‌：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

实验步骤‌：

‌试剂准备‌：将试剂盒平衡至室温(20-25℃)，洗涤缓冲液按1:19稀释。标准品梯度稀释至所需浓度。

‌加样‌：每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育90分钟。

‌洗涤‌：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后甩干，重复5次。

‌加检测抗体‌：每孔加入100μL检测抗体-HRP，37℃孵育60分钟。

‌洗涤‌：同步骤3。

‌显色‌：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分钟。

‌终止‌：每孔加入50μL终止液，立即摇匀（颜色由蓝变黄）。

‌检测‌：450nm波长测定吸光度(OD值)，15分钟内完成。

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关键实操技巧：

1.加样技巧

一次性换新枪头，垂直贴孔壁低位加液；避免气泡、飞溅交叉污染；整板加样速度均匀统一。

2.温育控温

须37℃恒温、封板膜严实防蒸发冷凝；时间严格卡死，过长背景高、过短信号低。

3.洗板核心

每孔注满不溢出，浸泡≥30 s；拍干用无尘吸水纸，杜绝残留；洗板不足直接高背景、假阳性。

4.样本规范

杜溶血、脂浊、污染样本；禁止反复冻融；严禁含 NaN₃抑制 HRP 活性；浓度超标只用试剂盒配套稀释液。

5.显色与读数

全避光；整板显色时长一致；加终止液立刻读数，放置越久数值漂移越大。

6.基础质控

样本、标准均做复孔；室温洁净避光操作；试剂分装取用，减少反复开盖失效。