本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专用于定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞上清液中的脑啡肽（ENK）浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL，灵敏度达 0.16 ng/mL，适用于痛觉调制、奖赏通路、应激反应及中枢神经肽调节研究等领域。

核心原理：

固相化：微孔板预先包被抗大鼠 ENK 抗体。

结合：加入标准品或样本，ENK 被固相抗体捕获。

检测：加入化的抗大鼠 ENK 抗体和 HRP 标记的亲和素，形成 "抗体 - 抗原 - 酶标抗体" 复合物。

显色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由蓝色变为黄色。

测定：用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值)，浓度与 OD 值成正比。

样本要求：

1. 样本类型与处理

‌血清‌：使用无热原/内毒素试管采集，避免溶血或脂血。1000×g离心10分钟分离血清，-20℃保存，避免反复冻融。

‌血浆‌：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，离心后取上清。

‌细胞上清‌：1000×g离心10分钟去除颗粒，-70℃保存。

‌组织匀浆‌：生理盐水匀浆后离心取上清，-20℃保存。

2. 注意事项

样本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。

细胞培养上清可能因细胞状态等因素导致检测波动，建议设复孔。

操作步骤：

1.平衡试剂：试剂盒室温平衡 30 min，浓缩洗涤液按比例稀释备用。

2.加样：设空白孔、标准品孔、样品孔，每孔加对应标准品 / 稀释后样本，封板温育。

3.温育反应：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗体结合。

4.洗板：弃液甩干，洗涤液注满每孔，浸泡后拍干，重复洗板3–5 次。

5.加酶结合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 标记抗体，封板 37℃再次温育。

6.再次洗板：同上述洗板流程，洗净未结合游离酶标物。

7.显色：每孔先后加入 A、B 显色液，避光 37℃显色 10–15 min。

8.终止读数：加终止液终止反应，颜色由蓝变黄；立即用酶标仪在对应波长测定 OD 值。

9.结果计算：以标准品浓度、OD 值绘制标准曲线，换算样本待测指标浓度。

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