BIU-87人膀胱癌细胞实验操作步骤

细胞传代与扩增
当细胞密度达到80%-90%时，需进行传代。弃去旧培养基，用预冷的PBS轻柔洗涤2次以去除残留血清。加入1-2 mL 0.25%含EDTA），37℃消化1-2分钟，显微镜下观察细胞回缩变圆后，立即加入含血清的培养基终止消化。吹打制成单细胞悬液，按1:3至1:4比例分装至新培养瓶，补充适量培养基，轻轻摇晃使细胞分布均匀，放回培养箱继续培养。

细胞冻存与复苏
冻存：取对数生长期细胞，消化离心后弃上清，用预冷的冻存液（含90%血清+10%DMSO）重悬，分装至冻存管（1-1.5 mL/管），标注细胞类型、代次及日期。程序性降温：4℃ 30分钟→-20℃ 2小时→-80℃过夜，最后转入液氮长期保存。
复苏：从液氮中迅速取出冻存管，37℃水浴震荡至冰晶融化，酒精消毒后转移至15 mL离心管，加5 mL培养基离心（1000 rpm, 5分钟）。弃上清，用新鲜培养基重悬，接种至培养瓶，24小时后更换培养基以去除DMSO残留。

实验干预与检测
根据研究目的，可进行药物处理、基因转染或siRNA干扰等操作。例如：
- 药物处理：将配置好的药液加入培养基，设置浓度梯度（如0 μM、5 μM、10 μM），每24小时观察细胞形态并记录。
- CCK-8检测：接种细胞至96孔板（3000-5000细胞/孔），干预后每孔加10 μL CCK-8试剂，孵育2小时，用酶标仪测定450 nm吸光度，计算细胞存活率。

‌数据整理与注意事项
- 每次实验需设立3个复孔，数据取均值±标准差。
- 严格无菌操作，定期检测支原体污染。
- 细胞代数控制在10-15代以内，避免遗传漂变。