细胞受杀伤性药物作用以后，可能出现多方面反应，细胞的形态和增殖生长的变化是晟易于显现的。检测药物对细胞增殖的影响情况可用于测试药物效应的研究。本节介绍的药物对细胞增殖影响的实验主要包括绘制生长曲线的细胞培养实验、成集落的细胞培养实验、有丝分裂指数测定的细胞培养实验、缩时电影显微摄像术的细胞培养实验。

一、绘制生长曲线的细胞培养实验

(一)试验原理

    绘制培养细胞的生长曲线可计数细胞增长的数值，从而直观地了解细胞生长与死亡的动态变化。常用于检测药物、培养液的成分和血清等对细胞生长的影响。

(二)材料

1．待检材料(药物)。

2．细胞培养成层的贴壁细胞。

3．试剂 0．25％溶液、O．02％EDTA溶液、培养基(RPMll640或DMEM)、小牛血清、Hanks液。

4．器材25ml培养瓶、CO2培养箱、倒置显微镜、微量加样器、血细胞计数板、对数坐标纸。

(三)买验方法

1.配制EDTA细胞分离液(消化液)，将0．25％溶液与等量目0．02%EDTA溶液混合而成。

2．将单层培养的细胞用细胞消化液进行消化，使之成为lml的细胞悬液。

3.待检药物处理细胞将待检药物稀释至合适作用浓度，向细胞悬液中加人一定量稍检药物作用8 h以上。

4.用Hanks液稀释成10ml，取少量置血细胞计数板内计数。将细胞悬液调节成(1～3)×105／ml，分别接种于25ml培养瓶中(根据实验需要决定接种瓶数及每瓶接种的数量)。

5．每天每组取3瓶计数，计算均值，连续计数7d。

(四)结果与分析

    用对数坐标纸，以细胞浓度为纵坐标，天数为横坐标，绘制生长曲线。

(五)注意事项

1.用悬浮培养细胞进行此项实验，除不用消化外，其余操作步骤均相同。但需离心收集细胞，再用Hanks液吹打成细胞悬液，然后计数。

2.在计数细胞期问，一般不更换培养液。若必须更换，实验组与对照组均同样更换。

3．每天细胞计数均应在相同时间进行，以便减少实验误差。

4.由于计数的误差和细胞在操作过程中丢失或死亡等因素的影响，应利用进入生长状态的细胞进行实验。除了进行此项实验外，一般应再做分裂指数测定、成集落实验等，互相参考。