NK细胞是一种异质性、多功能的细胞群，具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节功能，并参与移植排斥反应和某些自身免疫性疾病的发生，因而通过制备NK细胞克隆对其功能进行研究已受到人们的高度重视。测定人NK细胞活性多以K562细胞株作为靶细胞，而测小鼠NK细胞活性则用YAC细胞株，检测方法多种多样。

(一)形态法

    将效应细胞与靶细胞按一定比例混合温育，继而用台盼蓝或伊红Y等活细胞拒染的染料处理，然后分别计数着染的死细胞和不着染的活细胞，推算NK细胞活性。

1．材料

(1)靶细胞：K562细胞株或YAC细胞株。

(2)效应细胞：NK细胞。

(3)含15％NCS的RPMI 1640培养液，5％台盼蓝染色液。

2．方法：

(1)效应细胞的制备：将克隆的NK细胞用含15％NCS的RPMI 1640培养液悬浮，计数后调整细胞浓度至l×107／ml，备用。

(2)靶细胞的制备：取经24h培养的靶细胞，用RPMI 1640培养液洗涤1次，1000r／min离心6min。弃上清液，用：RPMI 1640培养液重悬后计数，并用0．5％台盼蓝染色计数，活细胞数达95％以上时可用作靶细胞。以RPMI l640培养液调整至1×105／ml，备用。

(3)效应细胞靶细胞作用：用40孔培养板，对照组1～3孔，每孔加100μl靶细胞，再加入RPMI 1640培养液100μl；实验组4～6孔，每孔加100gl靶细胞，再加入效应细胞100μl，效应细胞与靶细胞的比例为50：1。混匀，置5％CO2 37℃孵箱中培养过夜。

3．结果分析取m培养板，将细胞轻轻混匀成悬液，从每孔中取出30μl细胞悬液，加等量O．5％台盼蓝染液混合。室温下5min后，计数白细胞数。对照组和实验组每孔各计数100个细胞，分别记录死亡细胞和活细胞数，求出各组NK细胞活性的均值。

(二)酶释放法

    将效应细胞与靶细胞按一定比例混合温育，离心沉淀，取上清液检测靶细胞遭破坏后释放出的酶含量。

(三)荧光法

    用荧光素标汜靶细胞，经与效应细胞共温后，离心去上清液，用荧光计检测剩余的活靶细胞的荧光。

(四)核素法

    将效应细胞与靶细胞按一定比例混合共温后，离心检测上清液或剩余靶细胞放射性的量，间接反映其活性。有靶细胞胞浆释放法和胞核释放法两种。

(五)化学发光法

    当效应细胞与靶细胞接触时，效应细胞呼吸暴发，生成极不稳定的O 2-及OH一，放出光子，在发光剂存在条件下，可被光电倍增管接受和计数，发光量与NK细胞杀伤能力相关。