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细胞的培养方法

点击次数:834 更新时间:2016-04-06

    以前认为红细胞、粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等血细胞都属终末分化细胞,很难在体外培养生长或仅能短期培养而不能传代,近年来由于淋巴细胞培养基技术的发展,已有血细胞培养成功的报道,正常血细胞在体外培养生长时间短,只有白血病细胞,血友病细胞、淋巴瘤细胞可培养成功并建立细胞系,但多半为EB病毒等致瘤病毒引起的转化细胞,(EBNA检查阳性),二甲基亚砜(DMSO)处理也可诱导这些细胞分化发生逆转,表现为正常细胞。所建立的细胞系多半为单核细胞系、B淋巴细胞系、T淋巴细胞系,只在IL-2产品问世后,T细胞才可在体外建系、建株。

   血细胞可从外周血中用梯度液通过离心分层后分离获得。也可从脾脏、扁桃体、淋巴结中用机械法切碎过筛分离获得淋巴细胞,从腹腔刺激后的冲洗液中可获得大量的单核-巨噬细胞,从骨髓中可以获得前提血细胞,并可培养生长。加入生长因子或某些物质有利于细胞纯化并促进分化和生长繁殖,例如在淋巴细胞中加入IL-2(TCGF),可促进T细胞生长,建立T淋巴细胞系。在多发性骨髓瘤细胞(B细胞)培养中,加B细胞生长因子,可建立B细胞系;加入IL-6(或正常淋巴细胞培养48h的培养上清中的IL6)可使B细胞在体外培养,建立了IL-6依赖的B9细胞系。在骨髓单个核细胞培养中加入二羟基3,可使单个核细胞分化为成骨细胞及破骨细胞。

   人脐带血来源方便,采集容易,对母婴均无伤害。近年来研究表明,脐带血的血浆中富含许多高水平的造血活性物质,具有刺激和促进骨髓造血干/祖细胞增殖、分化和再植能力的功能,是造血生长因子的重要来源。

   脐带血中富含类似于骨髓的造血干细胞,其中CFU-G、BFU-E、CFU-GM近似或高于正常成人骨髓和外周血中的造血干/祖细胞,比骨髓更原始,具有很强的自我复制和再植能力。脐带血中还含有类似于骨髓的基质细胞,对骨髓造血具有支持作用,在体外培养扩增中具有更大的增值能力,是造血干细胞的理想来源,已被应用于Fanconi贫血、某些白血病和恶性肿瘤的治疗,并容易获得骨髓造血功能的重建。

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