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酶联免疫试剂盒吸附试验

点击次数:1613 更新时间:2016-12-01

酶联免疫试剂盒吸附试验

一  酶联免疫试剂盒用于标记的酶 用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化。目前应用较多的有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP应用zui广。
1.辣根过氧化物酶(HRP) 过氧化物酶广泛分布于植物中,辣根中含量zui高,从辣根中提取的称辣根过氧化物酶(HRP),是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白(含糖量18%),分子量约40 000,约由300个氨基酸组成,等电点为pH 3-9,催化反应的zui适pH值因供氢体不同而稍有差异,一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的zui大吸收光谱分别为275nm和403nm。
酶的纯度以RZ表示:RZ=OD403/OD275
纯酶的RZ多在3.0以上,zui高为3.4。RZ在0.6以下的酶制品为粗酶,非酶蛋白约占 75%,不能用于标记。RZ在2.5以上者方可用于标记。HRP的作用底物为过氧化氢,催化反应时的供氢体有几种:(1)邻苯二胺(OPD),产物为橙色,可溶性,敏感性高,zui大吸收值在490nm,可用肉眼观察判别,容易被浓硫酸终止反应,颜色可在数小时内不改变,是目前国内ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)中zui常用的一种;(2)联大茴香胺(OD),产物为橘黄色,zui大吸收值在400nm,颜色较稳定;(3)5-氨基水杨酸(5-AS):产物为深棕色,zui大吸收值在450nm,部分溶解,敏感性较差;(4)邻联甲苯胺(OT)产物为蓝色,zui大吸收值在630nm,部分溶解,不稳定,不耐酸,但反应快,颜色明显。
2.碱性磷酸酶 系从小牛肠粘膜和大肠杆菌中提取,酶联免疫试剂盒由多个同功酶组成。它们的底物种类很多,常用者为硝基苯磷酸盐,廉价无毒性。酶解产物呈黄色,可溶,zui大吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反应系统中,37℃1分钟水解1μg磷酸苯二钠为一个单位。

二  基本原理 ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种结合不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型,出现颜色反应。因此,可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应,颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪进行定量测定,这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来,使ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)方法成为一种既特异又敏感的检测方法。

人水痘带状疱疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA试剂盒    进口/分装    英文名称:    Human Varicella zoster virus IgM,VZV IgM ELISA Kit    规格:    96T/48T
人水痘带状疱疹病毒IgG(VZV-IgG)ELISA试剂盒    进口/原装    英文名称:    Human Varicella zoster virus IgG,VZV-IgG ELISA Kit    规格:    96T/48T
人军团菌抗体IgA(LP Ab-IgA)ELISA试剂盒    *    英文名称:    Human Legionella antibody IgA,LP Ab-IgA ELISA Kit    规格:    96T/48T
人军团菌抗体IgM(LP Ab-IgM )ELISA试剂盒    *    英文名称:    Human Legionella antibody IgM,LP Ab-IgM ELISA Kit    规格:    96T/48T
人军团菌抗体IgG(LP Ab-IgG)ELISA试剂盒    进口/分装    英文名称:    Human Legionella antibody IgG,LP Ab-IgG ELISA Kit    规格:    96T/48T
人腮腺炎病毒IgM ELISA试剂盒    进口/原装    英文名称:    Human paramyxovirus parotitis IgM ELISA Kit    规格:    96T/48T
人腮腺炎病毒IgG ELISA试剂盒    *    英文名称:    Human paramyxovirus parotitis IgG ELISA Kit    规格:    96T/48T
人EB病毒IgM(EBv IgM)ELISA试剂盒    *    英文名称:    Human epstein-barr virus IgM,EBv IgM ELISA Kit    规格:    96T/48T
人EB病毒IgA(EBv IgA)ELISA试剂盒    进口/分装    英文名称:    Human epstein-barr virus IgA,EBv IgA ELISA Kit    规格:    96T/48T
人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA试剂盒    进口/原装    英文名称:    Human epstein-barr virus IgG,EBv IgG ELISA Kit    规格:    96T/48T
人登革热抗体(DF-Ab)ELISA试剂盒    *    英文名称:    Human dengue fever antibody,DF ELISA Kit    规格:    96T/48T
人流感病毒抗体IgG(FLU)ELISA试剂盒    *    英文名称:    Human Influenza viruses IgG,FLU ELISA Kit    规格:    96T/48T
人腺病毒IgM(ADV-IgM)ELISA试剂盒    进口/分装    英文名称:    Human Adenovirus IgM,ADV-IgM ELISA Kit    规格:    96T/48T
人腺病毒IgG(ADV-IgG)ELISA试剂盒    进口/原装    英文名称:    Human Adenovirus IgG,ADV-IgG ELISA Kit     规格:    96T/48T
人轮状病毒(RV)IgM ELISA试剂盒    *    英文名称:    Human Rotavirus,RV IgM ELISA Kit    规格:    96T/48T

 

 

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