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ELISA试剂盒步骤及原理

点击次数:762次 更新时间:2016-11-30

ELISA试剂盒步骤及原理

      基本原理:本试剂盒采用双抗体夹心法。用抗Mouse ENA-78抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的ENA-78会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入化的抗Mouse ENA-78抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗Mouse ENA-78抗体与结合在包被抗体上的Mouse ENA-78结合、与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入发光底物混合液,发光底物在辣根过氧化物酶的催化下发出荧光,用化学发光免疫分析仪测定化学发光值(CL),ENA-78浓度与化学发光值之间呈正相关,通过绘制标准曲线求出标本中ENA-78的浓度。

操作步骤:

1、在各孔中加入标准品或样品各 100μL,37℃孵育90分钟

2、倒去孔内液体,拍干,加入 100μL  化抗体工作液,37℃孵育 60 分钟

3、洗涤 3 次

4、加入 100μL 酶结合物工作液, 37℃孵育 30 分钟

5、洗涤 5 次

6、加入 100μL 底物溶液, 37℃孵育 5 分钟左右

7、读数

基本原理:本试剂盒采用双抗体夹心法。用抗Mouse ENA-78抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的ENA-78会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入化的抗Mouse ENA-78抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗Mouse ENA-78抗体与结合在包被抗体上的Mouse ENA-78结合、与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入发光底物混合液,发光底物在辣根过氧化物酶的催化下发出荧光,用化学发光免疫分析仪测定化学发光值(CL),ENA-78浓度与化学发光值之间呈正相关,通过绘制标准曲线求出标本中ENA-78的浓度。

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