产品简介:
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),专用于定量检测大鼠细胞裂解液、血清、血浆、损伤组织匀浆中的 L-LDH 浓度。检测范围覆盖 0.313-20 ng/mL,灵敏度达 0.16 ng/mL,适用于细胞坏死 / 损伤评价、缺氧模型、糖酵解代谢、心肌及肝肾毒性研究。
产品名称:大鼠L-乳酸脱氢酶(L-LDH)elisa试剂盒
英文名称:L-LDH ELISA Kit
产品规格:48T/96T
货号:CS-6183E
检测原理:
大鼠L-乳酸脱氢酶(L-LDH) elisa试剂盒的原理是双抗体夹心法,通过固相载体捕获抗原,再用酶标记的检测抗体进行识别,最后通过底物显色反应来定量检测。
固相化:微孔板预先包被抗大鼠 L-LDH 抗体。
结合:加入标准品或样本,L-LDH 被固相抗体捕获。
检测:加入化的抗大鼠 L-LDH 抗体和 HRP 标记亲和素,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。
显色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化由蓝色变为黄色。
测定:用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度 (OD 值),浓度与 OD 值成正比。
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实验步骤:
1.加样孵育
每孔精准加入 100μL 对应标准品 / 待测样本,空白孔加等量样本稀释液;贴封板膜密封微孔板,置于 37℃恒温孵育箱,避光孵育 90min,保证抗原抗体充分结合。
2.洗板
轻柔弃去孔内液体,吸水纸上快速拍干;每孔加满洗涤工作液,静置浸泡 30s,甩干拍净;重复洗涤5 次,去除未结合杂质,降低背景值。
3.加酶结合物孵育
除空白孔外,每孔加入 100μL HRP 标记特异性检测抗体;轻微水平晃板混匀,重新封板,37℃避光恒温孵育 60min。
4.二次洗板
重复上述洗板操作 5 次,严格拍干孔内残留液体,杜绝残留洗液造成假阳性、数据偏差。
5.底物显色
避光条件下,每孔加入 90μL TMB 底物显色液,轻柔混匀;37℃避光精准孵育 10~15min,此时液体逐步显现蓝色,显色深浅与待测物含量正相关。
6.反应终止
严格遵循加样顺序,每孔快速加入 50μL 酸性终止液,轻晃微孔板充分混匀,蓝色即刻转为黄色,终止酶促显色反应。
7.上机读数检测
加终止液后15min 内,用酶标仪测定各孔 450nm 波长吸光度(OD 值);以标准品浓度为横坐标、OD 值为纵坐标绘制标准曲线,拟合方程计算待测样本目标蛋白浓度。