实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究,作为实验项目研究。下列产品详细介绍:
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
食管癌细胞;Eca-109[Eca109] | 贴壁生长 | EY-X63550 |
细胞名称 食管癌细胞;Eca-109[Eca109]
形态特性: 上皮样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 此细胞的STR与Hela细胞的STR一致。
培养条件: RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%
传代方法: 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况: PN
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 阴性
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除细胞消化液后,加入含血清的*培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
Homo sapiens, human细胞名称: 小鼠结缔组织L细胞株929克隆;
dparasiticus2-溴-4-氟-6-Human TCTN3 ELISA Kit
小鼠杂交瘤;AFM20092C9用途: 生物防治3-溴-5-氟甲苯Human TDP1(Tyrosyl-DNA phosphodiesterase 1) ELISA Kit
小鼠杂交瘤;AFG20081C8拉丁属名: Bacillus subtilis3-溴-5-氟甲苯Human TDRD3 ELISA Kit
杂交瘤;2D8F9H12拉丁属名: Pseudomonas brenneri4-苄氧基吲哚Human TCF7L1 ELISA Kit
杂交瘤;1G10C11B12拉丁属名: Wickerhamomyces anomalus4-苄氧基吲哚Human TCF7 ELISA Kit
杂交瘤;F3注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用4-苄氧基吲哚Human CD52(CAMPATH-1 antigen) ELISA Kit
杂交瘤;D6D注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用7-苄氧基吲哚Human TCERG1 ELISA Kit
鼠杂交瘤;TT3B9拉丁属名: Hyphopichia burtonii7-苄氧基吲哚Human TCHP ELISA Kit
杂交瘤;Mab-boDp1-F14注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用2-氯吡啶 N-氧化物 盐酸盐Human TCF12/HEB ELISA Kit
杂交瘤;6B8拉丁属名: Aspergillus japonicus(S,S)-1,2-双[(叔丁基)甲基膦]乙烷[η-(2,5-二环庚二烯)]合四氟酸铑(I)Human NPR2(Atrial natriuretic peptide receptor 2) ELISA Kit
杂交瘤;ETMcAb4F11拉丁属名: Lactococcus lactis subsp. lactis7-Methoxycoumarin-3-carboxylic acidHuman TBX15 ELISA Kit
杂交瘤;ETMcAb3A7拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae氘代正戊烷-d12Human TBX18 ELISA Kit
杂交瘤;AhMcAb 1F3拉丁属名: Citrobacter freundii基乙缩二乙Human TBX21/T-bet ELISA Kit
杂交瘤;2F11/A9用途: 与蚕豆、豌豆共生固氮基乙缩二乙Human TBX22 ELISA Kit
食管癌细胞;Eca-109[Eca109]人抗红细胞抗体(RBC)ELISA试剂盒SagELISAKit产品规格:48T/96T。
人抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)ELISA试剂盒SamELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)ELISA试剂盒SamELISAKit产品规格:48T/96T。
人抗巨噬细胞抗体(anti-macrophageAb)ELISA试剂盒SAPELISAKit产品规格:48T/96T。
人抗类风湿关节炎核抗原抗体(RANA)ELISA试剂盒SBAELISAKit产品规格:48T/96T。
人抗淋巴细胞抗体(ALA/LCA)ELISA试剂盒Sc1-70-AbELISAKit产品规格:48T/96T。
人抗磷壁抗体(TA)ELISA试剂盒SCAELISAKit产品规格:48T/96T。
人抗磷脂酰丝氨抗体(APSA)ELISA试剂盒SCCAg2ELISAKit产品规格:48T/96T。