兔痘病毒PCR试剂盒步骤注意事项：
1．基础程序；
2．扩增温度和延伸温度；
3．反应时间；
4．循环次数；
5．PCR 反应液的配制；
6．PCR技术的基本原理；
7．PCR的反应动力学；
8．PCR扩增产物；
9．PCR反应体系与反应条件。

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以下是兔痘病毒PCR试剂盒步骤的详细说明书：

使用方法：
注：兔痘病毒PCR试剂盒步骤所有试剂使用前需*解冻，混合均匀，6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理（样本处理区）
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等，具体提取方法请参照相关说明书；阳性质控品及阴性质控品无需提取，可直接使用。
2. 扩增试剂准备（PCR前准备区）
取N个（N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品）PCR反应管，每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量，两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD  RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s，转移至样本处理区。
2.加样（样本处理区）
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl，盖紧管盖，于6,000rpm离心10s，转移至扩增区。

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 杂交瘤(B类);Z1510A2G6A2F8

DDR1 Others Mouse 小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人细胞裂解液 (阳性对照)

LLC 小鼠肺癌细胞

HBL-100人整合SV40基因的上皮细胞 HBL-100 iegration of SV40 gene in breast epithelial cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

SHH Protein Human 重组人 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (aa 1-197, His 标签)

人成纤维细胞;HFF Hepa 1-6, 小鼠肝癌细胞 Mouse

人星形胶质细胞 Human

CM-R104大鼠脑膜细胞*培养基100mL

7130 人绒毛间叶成纤维细胞(HVT)( 5×105 )

小鼠胚胎成纤维细胞;BALB/C 3T3 小鼠骨髓基质细胞*培养基 100mL

野生型人c-kit受体细胞株;A7d

CD9 Others Human 人 CD9 / Tspan-29 人细胞裂解液 (阳性对照)

MCF-7（MCF7）（ATCC来源）, 人癌细胞

MDA-MB-231（ATCC来源）, 人癌细胞

Raji，人Butt's淋巴瘤细胞

Saos-2，人成骨肉瘤细胞

靛基质试验用培养基  英文名称；  Indole Test Medium  规格；  250g

酵母菌、霉菌、念珠菌、青霉、曲霉检验培养基  英文名称；    规格； 

察氏琼脂  英文名称；  Czapek Dox Agar  规格；  250g

产毒培养基  英文名称；  Toxin-Producing Medium  规格；  250g

高盐察氏琼脂  英文名称；  Salt Czapek Dox Agar  规格；  250g

马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）颗粒  Potato Dextrose Agar  300ml/袋*10

李氏菌增菌肉汤（LB1,LB2）基础颗粒  Listeria Enrichment Broth Base  225ml/袋*10

乳糖蛋白胨培养液颗粒  Lactose Peptone Broth  300ml/袋*10

LB肉汤颗粒  LB Broth  300ml/袋*10

改良马丁琼脂培养基颗粒  Martin Agar Medium, Modified  250g

兔痘病毒PCR试剂盒步骤察氏琼脂  用于青霉,曲霉鉴定及保存菌种用(GB标准)用途:用于青霉、曲霉鉴定及保存菌种用。成分(g/L)钠 3.0 1.0镁 0.5 0.5亚铁 0.01蔗糖 30.0琼脂 15.0用法称取本品 50.0g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装后 116℃高压灭菌 20 分钟,备用。注明：高压灭菌后有沉淀物。

产毒培养基  用于青霉,曲霉的产毒培养用途:用于青霉、曲霉的产毒培养。成分(g/L)籼米 250.0用法称取本品适量,分装试管或三角瓶,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。

高盐察氏琼脂  用于霉菌和酵母菌的计数(GB标准)用途用于霉菌和酵母菌的计数。成分（g/L）钠 2.0g 1.0g镁 0.5g 0.5g亚铁 0.01g蔗糖 30.0g氯化钠 60.0g琼脂 20.0g※请放置阴凉干燥处保存用 法称取本品11.4克，加热溶解于100ml蒸馏水中，115℃高压灭菌20分钟，备用。质量控制和典型特征接种10-100个霉菌于28℃培养48-96小时应生长良好。

玉米粉琼脂  用于真菌培养用途:用于真菌的培养及鉴定。成分(g/L)玉米浸粉 7.0琼脂 15.0pH值6.0 ± 0.2 25℃用法称取本品 22.0g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。

需要自备的器材：
1．兔痘病毒PCR试剂盒步骤仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光 PCR 反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水
处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。
特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，操作简单，定量准确快速。
2. 引物经过优化，特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照，便于分析试验结果。