细胞名称 低分化肺腺癌细胞;GLC-82[GLC82]
形态特性: 上皮细胞样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 该细胞源自一位患有肺腺癌的58岁的中国女性;原代培养,7天细胞开始生长,*传代84天,培养24个月;该细胞呈多边形;免疫抑制昆明小鼠及Wistar断奶大鼠癌细胞悬液皮下接种成功。STR检测发现该细胞被HeLa细胞污染。
培养条件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
传代方法: 1:5~1:10传代,建议初始浓度为2~4×104cells/cm2;2~3天换液1次。
传代情况: C5
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法(-)
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究,作为实验项目研究。下列产品详细介绍:
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
低分化肺腺癌细胞;GLC-82[GLC82] | 贴壁生长 | EY-X63271 |
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除细胞消化液后,加入含血清的*培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
吉氏色素,姬姆氏色素Histone H1.4 (D4J5Q) Rabbit mAb盐酸
6-FAM, SE;6-羧基荧光素琥珀酰亚酯Cyclin E2 Antibody吡咯烷-甲酸
6-FAM ;6-羧基荧光素Cyclin E2 Antibody1-Boc-吡咯烷甲
吖啶黄素Phospho-Cyclin B1 (Ser133) (9E3) Rabbit mAb三盐酸盐
5-FAM ;5-羧基荧光素Phospho-Stat4 (Tyr693) (D2E4) Rabbit mAb2-甲基-甲酸甲酯
黑色素(水溶)Cyclin B1 (V152) Mouse mAb*基膦
黑色素(溶)Phospho-Cyclin E1 (Thr62) Antibody-2-
7-羟基;伞形花内酯(标准品)MTHFD2 (D8W9U) Rabbit mAbDL-蛋氨酸
化血红素;血晶素Phospho-HSL (Ser565) Antibody1-甲基吡唑-甲酸
5- 羧基荧光素二酸酯;5-CFDAPhospho-HSL (Ser565) Antibody二甲基二酸
5(6)-羧基荧光素二酸酯Cyclin B1 Antibody溴-2-甲氧基
5-氨基荧光素Cyclin B1 Antibody氨基-2-萘甲酸
6-氨基荧光素Phospho-HSL (Ser563) Antibody2,2-二甲基-羟基
5(6)-氨基荧光素Phospho-HSL (Ser563) Antibody2,2-二甲基丁二酸
5-FAM, SE;5-羧基荧光素琥珀酰亚酯Phospho-Numb (Ser276) Antibody2-甲酸酯磺酰
5,6-FAM;5(6)-羧基荧光素RIP2 (D10B11) Rabbit mAb2,5-二
5(6)-FAM, SE; 5(6)-羧基荧光素琥珀酰亚酯Phospho-ALK (Tyr1096) Antibody硫代吗啉 1,1-二氧化物盐酸盐
S-腺苷-L-蛋氨酸;S-腺苷Phospho-ALK (Tyr1078) Antibody1,1-环基二羧酸
磺间甲氧嘧啶Calpastatin Antibody溴酮
磺间甲氧嘧啶(标准品)Ubiquityl-Histone H2A (Lys119) (D27C4) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)环孢菌素
雷奈酸锶Cleaved Notch1 (Val1744) (D3B8) Rabbit mAb1,1-二甲基脲
GDC-0941Cleaved Notch1 (Val1744) (D3B8) Rabbit mAb*基酸甲酯
L-165041AMPKβ2 Antibody溴-2-氟甲
盐酸头孢卡品酯AMPKβ2 Antibody
AMPKβ1/2 (57C12) Rabbit mAb酸甲酯
(标准品)AMPKβ1/2 (57C12) Rabbit mAbNG-甲基-L-
2,6-二靛酚钠(DCIP)ADAM9 (D64B5) Rabbit mAb四噻吩
ADAM9 (D64B5) Rabbit mAb香豆灵酸甲酯
β-萘酚,异萘酚EGR1 (15F7) Rabbit mAb一水肌酸
氨基酚EGR1 (44D5) Rabbit mAb1,1'-联-2-萘酚
邻二酚EPAC1 (5D3) Mouse mAb3,5-二甲
间二酚EPAC2 (5B1) Mouse mAb巯基
对叔丁基邻二酚PZR Antibody离子交换树脂
(2-噻唑基偶氮)间二酚MTAP AntibodyD-高
钴试剂(1-亚硝基-2-萘酚)DHX29 Antibody2,3,4,5,6-五氟甲酸
磺酚SPhospho-Glucocorticoid Receptor (Ser211) Antibody三
上皮样细胞生长特性: 贴壁生长Rat FGF15 Elisa Kit
小鼠杂交瘤细胞;4E-BP1形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长sheep IL-4 Elisa Kit
小鼠杂交瘤细胞;ABL2形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Porcine MMP-2 Elisa Kit
小鼠杂交瘤细胞;Akt2形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Rat Cardiac Troponin T Elisa Kit
小鼠杂交瘤细胞;Akt3形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Rabbit IgM Elisa Kit
小鼠杂交瘤细胞;AMACR形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Rat Angiopoietin 2 (ANG2) Elisa Kit
低分化肺腺癌细胞;GLC-82[GLC82]小鼠转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒BNPELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒BNPELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒BovineacetoneELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒BovineCholicacidELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒BovinelymphocytefactorELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒Bovinerudimentalbovineserumalbumincheck-upELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒BP180-AbELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒BPELISAKit产品规格:48T/96T。