吖啶橙(acridine orange，AO)是一种常用荧光染料，吖啶橙与原代细胞内的DNA、RNA都有亲和力，但有一定的特异性，即结合后发不同颜色的荧光，DNA呈亮绿色，而RNA呈橘红色至火红色。此法简便快捷，既可染活原代细胞又可染固定原代细胞。用于直凄染色观察活原代细胞或固定染色观察原代细胞均可。吖啶橙对活原代细胞毒性小，可用于直接染色活原代细胞和进行荧光显微镜观察，但不持久，用固定染色观察法效果更好。

(一)吖啶橙染色液的制备

    取1g吖啶橙，溶于100ml生理盐水中，配成1％的母液，4℃保存备用。使用时，用0．1mol／L PBS(pH4．8)稀释成O．01％的工作液。

(二)染色步骤以盖玻片培养法为例

1．标本用Hanks脱洗3次。

2．用95％乙醇溶液固定15～30min，取出后晾干。

3．用l％醋酸作用30s。

4．用PBS冲洗1min。

5．移入0．1mol／L吖啶橙显色液中染色1～5min，分色30s～2min。

6．用PBS冲洗lmin。细胞

7．移入O．1mol／L CaCl2中分色30s～2min。

8．用PBS冲洗1min。

9．用甘油一PBS(1：1)封片，立即观察(用激发波长405nm的滤光片)。

(三)结果

    细胞核内因含DNA而呈亮绿色，胞质及核仁因含RNA而呈橘红色或火红色。

(四)注意事项

    观察中应随时添加PBS以避免标本干涸，如用油浸镜观察，需再覆盖以大盖玻片盖在附有细胞盖玻片上(细胞面朝上)，用无荧光性油浸观察。标本在95％乙醇中能保存数日后仍能观察，如褪色，再用吖啶橙染色。